试论述一个完整的PCR反应体系的组成成分有哪些?各组分在PCR反应中的作用是什么?
主要包括模板、引物、DNTP, TAG DNA聚合酶和缓冲液等成分。模板为要复制的核酸 片段(靶核酸)。模板DNA的纯度、结构和数量是影响PCR的重要因素。反应体系中较低 量的模板有利于提髙扩增产量和减少非特异性扩增。引物为化学合成的两条寡核苷酸,决 定PCR产物的特异性。浓度过高容易生成引物二聚体或非特异性产物。脱氧核苷三磷酸 (DNTPS)为DATP、DCTP、DGTP和DTTP四种脱氧核苷三磷酸的混合物。反应体系中四种核 苷酸的浓度必须一致,以免增加反应错配率。浓度过高可使非特异性扩增增加,降低DNTP 浓度可提高反应特异性。TAQ DNA聚合酶具有很高的热稳定性,酶量过多不仅浪费,而且 使非特异性扩增增加。缓冲液为PCR提供最适反应条件。氯化钾、硫酸铵或其他一价阳离 子是缓冲液的重要成分,影响DNA变性和退火温度以及酶活性。镁离子对退火温度也有 影响,并且是TAQ DNA聚合酶不可或缺的辅助因子,对于稳定核苷酸和扩增体系、提高TAQ DNA聚合酶的活性十分重要。