试综述常见的检测PCR产物点突变的方法有哪些?简述其原理。

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试综述常见的检测PCR产物点突变的方法有哪些?简述其原理。

PCR-RFLP、PCR-ASO、PCR-SSCP、变性梯度凝胶、熔解曲线分析。 PCR-RFLP.是采用特定的限制性内切酶对PCR产物进行处理,对酶切后的片段长 度进行多态性分析,用以判断在酶切位点是否存在点突变的一种方法。 PCR-ASO,是釆用寡核苷酸探针与PCR产物杂交以检测点突变的技术。 PCR-SSCP:是根据单链DNA分子能自发地形成二级结构,且二级结构的空间构象 取决于DNA分子本身的碱基组成。 变性梯度凝胶:是根据DNA双链分子局部变性为单链后导致电泳迁移率下降的特 性,釆用梯度变性胶来分离DNA片段的技术。 (5)熔解曲线分析:是根据野生序列和突变序列的TM不同因而产生不同的熔解曲线 而设计的检测核酸突变和多态性的技术。

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