试分析对于一段DNA片段应釆用什么样的测序方案?

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试分析对于一段DNA片段应釆用什么样的测序方案?

可从DAN片段的大小;DNA片段的背景资料;测序的目的等方面来考虑:①如果序列已知,或片段两端部分序列已知,且大小小于1KB,可采用确证性测序策略,即直接将待测片段克隆到M13MP或质粒载体中,进行测序;如片段较大,可从两端开始测序,通过中间重叠部分拼出全序列;更大的DNA序列,在序列适当区域增加一个或数个测序引物,分别测序再拼出全序列。②未知序列DNA,如果DNA片段较小,可直接用M13MP或质粒系统克隆、测序。如果是数千个碱基的大片段,就必须将其切割 成适当大小的各个片段(<LKB)分别进行次级克隆再进行测序,最后拼出全序列。可采用随机克隆法或引物步移法。

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