综述如何设计高质量的实时荧光定量PCR引物。
设计引物时应注意①在实时荧光PCR中，单链引物的最适 长度为15〜20BP，GC含量在20%〜80%(45%〜55%最佳)。②TAQMAN引物的TM值最好 应在68〜70°C，分子信标和杂交探针相关引物的TM值变化区间可大一些，但对于同一对 引物而言，其TM值应接近，差异不要超过2°C。③为了尽量减少在PCR反应过程中非特异 扩增，引物的3’端最好不为G和（或）C。引物3#端的5个碱基不应出现2个G和（或）C。 如果用SYBR GREEN I方法，所用的PCR引物应尽量避免形成明显的引物二聚体。④扩增 片段的长度根据所釆用的技术不同有所区别：SYBR GREEN' I技术通常要求扩增片段不大于300BP, TAQMAN探针技术要求扩增片段应在50〜150BP，不能超过400BP。
