试论述膜上印迹杂交的分类及其原理和应用。
膜上印迹杂交包含SOUTHERN杂交、NORTHERN杂交、斑点及狭缝杂交和反向点杂交。SOUTHERN 印迹杂交是将电泳分离的待测DNA片段固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的位置上显示杂交信号的方法,检测的靶分子是DNA,用于单基因遗传病的基因诊断以及基因点突变的检测;NORTHERN 印迹杂交检测的原理与SOUTHERN 印迹杂交相似,只是检测的靶分子是RNA,用于RNA病毒的检测以及基因表达的检测;斑点杂交与狭缝杂交是将RNA或DNA变性后直接点样或用狭缝点样器加样于硝酸纤维素膜或尼龙膜上,再用探针进行杂交,可检测DNA也可检测RNA,可用于病原体检测;反向点杂交是先将待用的多种探针点到膜上,每个探针一个点,再将待测的DNA样本(生物素标记的PCR产物)与之杂交,这样待检样本就会与具有同源序列的探针结合。这样的方法称为反向点杂交(REVERSE DOT BLOT,RDB),可用于病原体检测、基因分型、基因突变检测等。