试论述如何提高杂交技术的杂交信号检测效率？
需综合考虑以下因素：①选择探针：根据不同杂交实验要求，选择不同的核酸探针。检测单个碱基改变选用寡核苷酸探针；检测单链选用与其互补的DNA单链探针、RNA探针或寡核苷酸探针；检测复杂的靶核苷酸序列和病原体选用特异性强的长的双链DNA探针；原位杂交选用寡核苷酸探针和短的PCR标记探针。②探针的标记方法：考虑实验的要求，如灵敏度和显示方法，检测单拷贝基因序列时，选用标记效率高，显示灵敏的探针标记方法。对灵敏度要求不高时，选用保存时间长的探针标记方法。③探针的浓度：一般来说，探针浓度增加，杂交率也增加，但过高会增加背景颜色。最佳原则是应用与靶核苷酸探针达到最大结合度的最低探针浓度。④杂交率：杂交初始速度依赖于探针的长度和浓度。⑤杂交温度：在杂交速率最大的温度条件下进行杂交反应，RNA:DNA杂交温度为TM值下10-15℃，DNA：DNA杂交温度为TM值下10-15℃。⑥杂交的严格性：通过调节盐浓度、甲酰胺浓度和杂交温度来控制所需严格性。⑦杂交反应时间：探针浓度、探针复杂性以及杂交体积，所含甲醛情况均可影响杂交时间。⑧杂交促进剂：惰性多聚体可增加杂交速率。
