试论述从细胞或组织中提取蛋白的常用方法。
1.根据蛋白分子大小不同分离纯化,如:透析和超滤:利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质,使蛋白质和其他小分子物质如无机盐、单糖、水等分开。离心分离:利用物质沉降系数、质量、形状及密度的不同。 凝胶过滤层析:利用凝胶介质交联度或者孔度(网孔大小)来决定凝胶的分级范围。2.根据蛋白分子溶解度不同分离纯化,如:等电点沉淀和PH值控制:等电点时蛋白质净电荷为零,溶解度最低;蛋白质的盐溶和盐析:中性盐对球状蛋白质的溶解度有明显影响;有机溶剂法:与水互溶的有机溶剂(甲醇、乙醇和丙酮等)能使蛋白质在水中的溶解度显著降低。3.根据蛋白表面电荷不同分离纯化,如:电泳和离子交换层析。4.采用配体的特异性亲和力分离纯化:根据蛋白质能够特异性地与另一种配体非共价结合而提出的蛋白质亲和层析,是一种针对性最强的蛋白质分离方法。