现有一分离纯化的RNA样本,试论述如何鉴定该RNA样本满足实际应用?
主要从三个方面进行鉴定①RNA的含量测定。可利用紫外分光光度法检测RNA样品含量。RNA在260NM处有明显吸收峰,根据A260可估测样品中RNA浓度,A260=1时,RNA含量为40UG/L;②RNA的纯度鉴定。RNA最大吸收峰在260NM波长处,蛋白质的最大吸收峰在280NM处,盐和小分子最大吸收峰在230NM处。可用為A260/ A260比值估计RNA的纯度,纯RNA值为1.8-2.0,比值较低提示蛋白质污染,A26030/ A260比值在0.4-0.5间,如比值高说明残余的盐分比较多,据此可判断DNA纯度;③RNA完整性鉴定。可用琼脂糖凝胶电泳检测。完整性好的RNA样品,经电泳可见18S、28S、5.8S三条特征性条带,28S的荧光强度是18S的2倍。