简述比较基因组杂交技术的原理。

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简述比较基因组杂交技术的原理。

采用两种不同荧光素标记物,分别对被检测患者DNA和正常人的对照DNA样品进行荧光标记,用绿荧光素(FITC等)标记待测DNA和红荧光素(TRITC等)标记正常对照DNA作为探针,将两种等量混合的探针,与正常人淋巴细胞的有丝分裂中期染色体进行杂交,以过量的COT-1 DNA抑制分散重复序列(INERSPERSED REPETITIVE SEQUENCE,IRS),这种竞争性杂交的结果通过染色体上绿色/红色两种荧光信号的相对强度比率反映出来,借此了解患者染色体DNA拷贝数的改变,并能同时在染色体上定位。杂交图像经荧光显微镜、CCD采集,所有这些信号的差异可通过荧光显微镜观察记录并由配置的电脑软件进行分析和处理。根据每条染色体上每个位点的两种荧光强度之比绘制曲线,以该曲线与正常值区间(固定阈值)的关系来判断待测DNA在染色体不同区域的拷贝数与正常人相比有无异常。

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