试述大肠菌群检验的方法步骤。
(1)发酵试验:将待检样品10倍稀释后,取1mL及0.1mL各3份,分别将菌种接种于乳糖胆盐发酵管各3管,置36±1℃温箱内培养24±2h,如所有发酵管均不产气,可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,分别进行分离培养。(2)分离培养:将产气的发酵管分别转接在伊红—美蓝琼脂平板上,36±1℃培养18h~24h后观察菌落形态并进行革蓝氏染色和证实实验。(3)证实实验:挑取上述平板上呈黑色并带有金属光泽的菌落1~2个进行革兰氏染色,同时接种于乳糖发酵管,置36±1℃培养24±2h观察产气情况,凡乳糖管产气,革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。(4)报告:根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的可能数。